APLICACION DE LA VITAMINA B12 EN EL TRATAMIENTO DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS

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La enfermedad de Chagas es causada por Trypanosoma cruzi, un parásito unicelular que requiere compuestos hémicos para su crecimiento.¹ Sabiendo que la hemina y las porfirinas relacionadas tienen una importante acción citotóxica mediada por la generación de especies reactivas de oxígeno (ROS), en trabajos anteriores evaluamos el efecto de altas concentraciones de hemina sobre epimastigotes de T. cruzi. Observamos que las concentraciones en el medio de cultivo mayores de 15 mg/l eran capaces de inhibir el crecimiento del parásito, induciendo la transformación de epimastigotes a amastigotes, junto con un importante daño oxidativo intracelular.² La vitamina B₁₂ o cianocobalamina es un análogo estructural del grupo hemo; al tratar in vitro epimastigotes de T. cruzi con dicha vitamina pudimos determinar su efecto tripanocida dependiente de la dosis, con valores de concentración inhibitoria del 50% (IC50) similares a los que presenta el benznidazol, empleado como droga de referencia. Tratando los parásitos con la combinación de benznidazol y vitamina B₁₂ encontramos que ambos compuestos tienen efectos aditivos.

Por citometría de flujo pudimos determinar que el tratamiento a lapsos cortos con altas dosis de vitamina B₁₂ (condiciones empleadas para dilucidar el mecanismo de acción) produce un estrés oxidativo elevado en el interior de los parásitos. El sistema enzimático de defensa antioxidante mostró, durante las primeras horas de tratamiento, daño y disminución de la actividad de las enzimas superóxido dismutasa (SOD) y ascorbato peroxidasa (APx). Con el correr del tiempo, dichas actividades se recuperan y aumentan hasta alcanzar valores 50% mayores que el control no tratado. A pesar de este aumento de actividad, el estado oxidativo intracelular inducido por la vitamina B₁₂ persiste, debido probablemente a un proceso metabólico incompleto de las ROS, que se correlaciona con la falta de activación que muestra la tripanotiona reductasa (TryR). Inesperadamente, agentes antioxidantes como el ditiotreitol o el ácido ascórbico (vitamina C) incrementan considerablemente el efecto tripanocida de la vitamina B₁₂.
En la primera etapa de la infección, los tripomastigotes no replicativos invaden los diferentes tipos de células de mamíferos, en las cuales se transforman a amastigotes replicativos y se multiplican dentro del citoplasma. Cuando evaluamos la actividad de la vitamina B₁₂ sobre estos estadios encontramos efectos tripanocidas similares a los que presenta el benznidazol, por lo cual decidimos realñizar un ensayo in vivo sobre un modelo murino de infección aguda. Los animales fueron inoculados con tripomastigotes sanguíneos y a los cinco días posinfección (dpi) dicha infección fue confirmada por microhematocrito, con lo que se dio comienzo al tratamiento con vitamina B₁₂ sola, vitamina B₁₂ junto con vitamina C, benznidazol solo y benznidazol administrado conjuntamente con las vitaminas. Como control, un grupo de ratones fue tratado sólo con solución a,ortiguadora. Al día del pico de parasitemia, todos los ratones tratados presentaron una disminución en su carga parasitaria en comparación con el control (p < 0.01), cabe acotar que estas manifestaciones generalmente se presentan alrededor de las dos semanas posteriores a la infección. La administración de la vitamina B₁₂ sola indujo una reducción en la parasitemia, pero ésta fue mayor al ser coadministrada junto con la vitamina C. Los animales tratados con benznidazol solo o benznidazol junto con las vitaminas presentaron niveles de parásitos circulantes al día del pico de parasitemia similares; sin embargo, se observaron diferencias al considerar la cinética de la fase aguda de la infección. De esta manera, al calcular el área bajo la curva de parasitemia verificamos que la disminución fue del 43.9% para los ratones tratados con las vitaminas y del 58.6% para los tratados con benznidazol. Al combinar los tratamientos, la reducción alcanzó un 64.6%. Esta disminución en la parasitemia fue crucial para la supervivencia de los animales. Los ratones del grupo control tuvieron gran cantidad de parásitos circulantes que los llevaron a la muerte entre los días 14 y 28 posinfección. En contraste, el 83% de los ratones tratados con benznidazol juntamente con las vitaminas sobrevivieron hasta el final de los experimentos (100 dpi). Sólo este grupo de animales presentó una supervivencia significativa en comparación con el grupo control (p < 0.05).

Ésta es la primera vez que el efecto de la vitamina B₁₂ es evaluado sobre T. cruzi. La marcada actividad tripanocida encontrada, así como la baja toxicidad evaluada, justifican el alto índice de selectividad (> 200) que presenta la vitamina B₁₂ en todos los estadios parasitarios. Este dato es de particular importancia, ya que un valor > 50 es considerado adecuado en la busqueda de nuevos agentes tripanocidas.³

El benznidazol es el fármaco empleado actualmente para el tratamiento de la enfermedad de Chagas, con muy buenos resultados en la fase aguda de la infección y en personas de corta edad; sin embargo, su empleo en pacientes crónicos es un tema aún discutido. El benznidazol tiene efectos secundarios indeseables importantes como anorexia, vómitos, polineuropatía periférica, así como dermopatía alérgica. Por el contrario, la vitamina B₁₂ raramente presenta efectos secundarios y es una sustancia de venta libre. La administración de la vitamina fue capaz de mejorar el poder antiparasitario del tratamiento con benznidazol, y puso de manifiesto su potencial como candidato a nuevas modalidades terapéuticas de la enfermedad de Chagas.