LA COADMINISTRACIÓN DE IVERMECTINA DISMINUYE LOS NIVELES EN LECHE DEL ANTIBIÓTICO DANOFLOXACINO EN OVEJAS

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Hasta el momento conocíamos que el antibiótico danofloxacina se secretaba a la leche de forma activa, pero se desconocía el mecanismo implicado en el proceso.
Para estudiar dicho mecanismo, primero demostramos que el danofloxacino es sustrato in vitro del transportador ABCG2/BCRP, proteína implicada en la secreción de fármacos a leche (Jonker y cols., 2005). Para ello, utilizamos células MDCKII que son células polarizadas de epitelio renal canino. Las células MDCKII-Bcrp1 y MDCKII-BCRP se caracterizan por expresar, de manera estable, el transportador BCRP al estar transducidas con el cDNA del gen Bcrp1 de ratón y con el cDNA BCRP humano, respectivamente. Estos subclones fueron suministrados por el Dr. Alfred H. Schinkel del Netherlands Cancer Institute de Holanda y han sido descritos previamente por Pavek y cols. (2005). Para poder analizar la posibilidad de que el danofloxacino sea sustrato de BCRP in vitro, se utilizó el modelo de cultivo en Transwell. Este modelo se emplea de forma rutinaria para este tipo de ensayos, ya que al trabajar con dos compartimentos estancos a ambos lados de una monocapa celular, permite estudiar el transporte apical-basal respecto al basal-apical. Los resultados obtenidos indicaron que, a la concentración estudiada (10 μM), en el caso de las líneas transducidas con el transportador, que tiene una expresión apical, se producía una direccionalidad en el transporte, siendo éste mayor en dirección basal-apical. Además, al añadir el inhibidor específico de BCRP Ko143 (Allen y cols., 2002), el transporte vectorial mediado por Bcrp1/BCRP desapareció, y los resultados obtenidos fueron muy similares a los de la línea parental, en los que los porcentajes de transporte basal-apical y apical-basal fueron muy parecidos. Cuando se añadió ivermectina a 50 M, el transporte vectorial de danofloxacino mediado por Bcrp1/BCRP disminuyó de forma importante, dando lugar a un patrón de traslocación vectorial similar al obtenido con Ko143. Estos experimentos demostraron que el danofloxacino es sustrato in vitro del transportador BCRP y que la ivermectina inhibe el transporte de danofloxacino mediado por BCRP.
Para explorar en profundidad las interacciones del danofloxacino con Bcrp1, se estudió la capacidad de este antibiótico de revertir la reducción en la acumulación de mitoxantrona (sustrato de BCRP) en las células que sobreexpresan Bcrp1 mediante experimentos de citometría de flujo. La acumulación de mitoxantrona en las células que sobreexpresan el transportador aumentó mediante la inhibición de Bcrp1 con Ko143. Sin embargo, cuando se añadió danofloxacino no se observó ningún efecto, sugiriendo que esta fluoroquinolona no es un inhibidor efectivo de Bcrp1 a la concentración de 200-500 M.
A continuación, para estudiar la implicación de BCRP en la farmacocinética plasmática y la secreción de danofloxacino a leche, se utilizaron ratones wild-type y knockout en el transportador, a los que se administró el antibiótico y se determinaron los niveles del fármaco en plasma y leche. No se demostró ninguna evidencia de la implicación del transportador en la farmacocinética plasmática de danofloxacino. Sin embargo, tanto la concentración en leche de danofloxacino como el ratio leche/plasma fueron 2 veces superiores en los ratones wild-type en comparación con los knockout en el transportador. Estos datos indican que el danofloxacino se transporta de forma activa a la leche de los ratones mediante Bcrp1.
Por último, para demostrar el papel de las interacciones farmacológicas mediadas por BCRP en la secreción de danofloxacino a leche, se coadministró ivermectina (0.2 mg⁄ kg, s.c.). junto con danofloxacino (1.25 mg⁄ kg, i.m.) a ovejas Assaf, y se midieron las concentraciones en plasma y leche de danofloxacino mediante HPLC. No se encontraron diferencias significativas en las concentraciones plasmáticas entre los animales administrados con danofloxacino solo o con ivermectina. Sin embargo, la secreción de danofloxacino a leche disminuyó casi un 40% tras la coadministración de ivermectina. Estos datos demuestran que la ivermectina afecta de forma significativa a la secreción en leche del antibiótico danofloxacino sin modificar sus niveles plasmáticos.
Así pues, la administración concomitante de múltiples fármacos, práctica ampliamente utilizada en medicina veterinaria, puede no sólo afectar a su actividad farmacológica sino también a su secreción en leche, debido a interacciones farmacológicas mediadas por el transportador BCRP. Este hecho se ha confirmado posteriormente por nuestro grupo de investigación con la coadministración de los antiparasitarios triclabendazol (inhibidor de BCRP) y moxidectina (sustrato de BCRP) (Barrera y cols., 2013) e incluso con la coadministración de inhibidores naturales presentes en la soja como las isoflavonas (Perez y cols., 2013).

Bibliografía del artículo
Allen, J.D., van Loevezijn, A., Lakhai, J.M., van der Valk, M., van Tellingen, O., Reid, G., Schellens, J.H., Koomen, G.J. & Schinkel, A.H. (2002) Potent and specific inhibition of the breast cancer resistance protein multidrug transporter in vitro and in mouse intestine by a novel analogue of fumitremorgin C. Molecular Cancer Therapeutics, 1, 417–425. Barrera, B., González-Lobato, L., Otero, J.A., Real, R., Prieto, J.G., Álvarez, A.I. & Merino, G. (2013) Effects of triclabendazole on secretion of danofloxacin and moxidectin into the milk of sheep: role of triclabendazole metabolites as inhibitors of the ruminant ABCG2 transporter. The Veterinary Journal,198, 429-436. Jonker, J.W., Merino, G., Musters, S., van Herwaarden, A.E., Bolscher, E., Wagenaar, E., Mesman, E., Dale, T.C. & Schinkel, A.H. (2005) The Breast Cancer Resistance Protein (BCRP ⁄ ABCG2) concentrates drugs and carcinogenic xenotoxins into milk. Nature Medicine, 11, 127–129. Pavek, P., Merino, G., Wagenaar, E., Bolscher, E., Novotna, M., Jonker, J.W. & Schinkel, A.H. (2005) Human breast cancer resistance protein (BCRP ⁄ ABCG2): interactions with steroid drugs, hormones, the dietary carcinogen PhIP, and transport of cimetidine. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 312, 144–152. Perez, M., Otero, J.A., Barrera, B., Prieto, J.G., Merino, G. & Alvarez, A.I. (2013) Inhibition of ABCG2/BCRP transporter by soy isoflavones genistein and daidzein: effect on plasma and milk levels of danofloxacin in sheep. The Veterinary Journal, 196, 203-208.