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ANALISE DO PAREAMENTO 3’-TERMINAL DURANTE A REAÇAO DE POLIMERIZAÇAO EM CADEIA

ANALISE DO PAREAMENTO 3’-TERMINAL DURANTE A REAÇAO DE POLIMERIZAÇAO EM CADEIA

(especial para SIIC © Derechos reservados)
Nossos estudos tem o objetivo de avaliar como ocorre o pareamento 3' terminal entre o primer de PCR e a seqüência molde, e determinar o efeito da interação entre diversas condições de amplificação com a eficiência e especificidade da reação.
alvesvianna9.jpg Autor:
Beatriz Alves Vianna
Columnista Experto de SIIC

Institución:
Departamento de Ciencias Biológicas Centro de Ciencias Humanas y Naturales Universidad Federal de Espírito Santo


Artículos publicados por Beatriz Alves Vianna
Coautores
Ângela Maria Spagnol Perrone* Eldamária de Vargas Wolfgramm** Maria do Carmo Pimentel Batitucci*** Flávia de Paula*** Iúri Drumond Louro**** 
Bióloga, Universidade Federal do Espírito Santo*
Graduanda em Ciências Biológicas, Universidade Federal do Espírito Santo**
Bióloga, PhD, Universidade Federal do Espírito Santo***
Médico, PhD, Universidade Federal do Espírito Santo****
Recepción del artículo
8 de Junio, 2005
Aprobación
8 de Julio, 2005
Primera edición
27 de Enero, 2006
Segunda edición, ampliada y corregida
19 de Febrero, 2007

Resumen
A técnica de PCR ARMS (amplification refractory mutation system), descrita primeiramente por Newton et al, 1989 permite o diagnostico de qualquer mutação conhecida no DNA genômico de forma simples, rápida, confiável e de baixo custo. O ARMS é uma adaptação da PCR, onde dois primers senso são desenhados com tamanhos diferentes e extremidades 3’ complementares ao alelo normal ou mutado (alelo específicos) e um primer anti-senso complementar a ambos alelos, amplificando assim seqüências de tamanhos distintos. A técnica é baseada no princípio de que a Taq DNA polimerase não apresenta atividade 3’-5’ exonuclease, de modo que o mal pareamento entre a extremidade 3’ do primer e o DNA molde (template) resulta na impossibilidade de amplificação. Nossos estudos tem o objetivo de avaliar como ocorre o pareamento 3' terminal entre o primer de PCR e a seqüência molde, e determinar o efeito da interação entre diversas condições de amplificação com a eficiência e especificidade da reação. A doença utilizada como modelo foi a Fibrose Cística, onde algumas mutações de ponto são responsáveis pela maioria dos casos, nos possibilitando assim desenhar primers para as mutações conhecidas e testar suas condições de amplificação em indivíduos normais e afetados.

Palabras clave
Multiplex ARMS, primers, pareamento, amplificação, mutações


Artículo completo

(castellano)
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Abstract
PCR ARMS (amplification refractory mutation system) was first described by Newton et al, 1989. Soon after the method became established it was possible to make fast analyses of any known mutation in genomic DNA. The system is simple, quicker and less expensive. Two allele-specific oligonucleotide primers, one specific for the normal allele and one specific for the mutation form, together with another primer complementary to both alleles were used in the polymerase chain reaction. Because Taq DNA polymerase lacks a 3’ exonuclease activity, it is unable to repair a single-base mismatch between the primer and the template at the 3’ end of the DNA primer. We are interested to discover how the annealing between the primer and the template in the 3’ end occurs, and to know more about the effects of the interaction between the conditions of amplification and specificity/efficiency of reaction. We used cystic fibrosis as a model to test the experiments.

Key words
Multiplex ARMS, primers, aneealing, amplification, mutation


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Especialidades
Principal: Bioquímica
Relacionadas: Diagnóstico por Laboratorio, Genética Humana



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Drumond Louro I
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