DESARROLLAN UN METODO ECONOMICO Y RAPIDO PARA EL DIAGNOSTICO DE ROTAVIRUS

Diseño de un enzimoinmunoensayo

Pune, India

El enzimoinmunoensayo descripto en este estudio es simple y fácil de llevar a la práctica permitiendo realizar un diagnóstico preciso de las diarreas por rotavirus.

 Fuente científica:  Indian Journal of Medical Research (IJMR) 119(2):60-65 aSNC

 Autores: 

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Conflicto de interés:  KJ7304

La infección por rotavirus es común en niños en edad preescolar, siendo una de las causas más comunes de diarrea en este grupo etario. Desde el aspecto clínico la gastroenteritis por este virus se caracteriza por una diarrea profusa, con fiebre y vómitos que pueden llevar a una deshidratación leve a severa. Sin embargo, las manifestaciones clínicas no son distintivas para permitir el diagnóstico. En este contexto se requiere de un método diagnóstico simple y económico para la detección de esta infección. Existe un enzimoinumnoensayo (ELISA) comercial desarrollado en Dinamarca que tiene alta sensibilidad y especificidad; pero su elevado costo hace que el mismo no pueda ser utilizado en los países en desarrollo. Sobre estas bases, investigadores del Departamento de Rotavirus, Instituto Nacional de Virología, Pune, India se propusieron como objetivo desarrollar una prueba para el diagnóstico rápido de la infección por rotavirus.El diseño del ELISA era de tipo sandwich; la muestra a evaluar se agregaba a los pocillos de la placa recubiertos con suero con anticuerpos anti-rotavirus o sin anticuerpos (control negativo), luego de incubar y lavar se revelaba por el agregado de un conjugado que consistía en suero anti-rotavirus marcado con peroxidasa y su sustrato. En primer lugar se preparó un stock de rotavirus simiano SA-11 por infección de una línea celular permisiva. El virus se semipurificó y se utilizó para inmunizar conejos mediante la inoculación de 20 μg de proteína viral/dosis/conejo. Se administraron 3 dosis, 2 por vía intravenosa y la última por vía intramuscular. Luego de 10 días de la última inmunización se obtuvo el suero del animal para ser utilizado en el ELISA diagnóstico. Con una dilución 1/10 000 de este suero se recubrieron pocillos de una placa de ELISA. Como control negativo se utilizó suero del mismo animal previo a la inmunización. Por otra parte se preparó un conjugado del suero anti-rotavirus con peroxidasa de rabanito. Las muestras que se utilizaron para probar el ensayo provenían de pacientes atendidos entre los años 1990-1997 con infección por rotavirus. Se utilizaron 96 muestras positivas (95 de materia fecal y un control de virus SA-11); y 62 muestras negativas (60 de materia fecal y 2 controles negativos correspondientes a buffer fosfato salino y sobrenadante de una línea celular no infectada). Todo el ensayo lleva aproximadamente 4 horas. Este ELISA se comparó con uno previamente desarrollado el NIV que tenía 100% de sensibilidad y especificidad pero una duración de 6 horas. Se evaluaron un total de 158 muestras, incluyendo un control positivo y 2 controles negativos que se ensayaron simultáneamente por el ELISA NIV y el NIV rápido. Entre las 155 muestras, 96 fueron positivas por el NIV rápido y sólo 95 fueron positivas por el NIV de rutina. Los valores de densidad óptica medidos fueron más altos con el ELISA rápido. La sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y negativo para el ELISA rápido tomando como resultado la relación entre el valor de densidad óptica de la muestra sobre la del control negativo fueron de 97.89, 95, 96.88 y 96.61 respectivamente. Estos valores se consideraron tomando como técnica estándar de referencia el ELISA NIV de rutina.El ELISA desarrollado presenta las ventajas de ser fácil de llevar a la práctica, tiene una duración más corta comparado con el ELISA de rutina; presenta alta sensibilidad y especificidad y sería económico para la evaluación de un gran número de muestras en forma simultánea y con reactivos producidos en el laboratorio.

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